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    液相方法开发中缓冲盐选择指导原则

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    液相方法开发中缓冲盐选择指导原则
    * 来源 : * 作者 : admin * 发表时间 : 2018-01-05 * 浏览 : 0

    液相方法开发中缓冲盐选择指导原则

    2017-12-11 占小兵 研发之友

     

    前言

    液相方法很多用到缓冲盐,我在从事研发工作的过程中,发现很多同仁对缓冲盐在液相方法中的应用不是太了解,遂分享一部分我的看法,抛砖引玉,相互交流。

     

     

    适用范围

     

    本指导原则仅适用于反向色谱与离子对色谱方法开发过程。

     

     

    何时应用缓冲盐?

     

     

    样品或样品中需研究的关键杂质有离子化倾向,其他特定少数情况另行叙述。

    存在较强离子化倾向的组分,其中一部分是分子状态,与反相色谱固定相结合的更好;另一部分是离子状态,更亲和于流动相。如不使用缓冲盐控制其电离状态,即分子状态和离子状态的比例,很容易出现峰拖尾分叉变形的情况。这种情况下一般就不应该使用水/有机相系统作为流动相,应选用缓冲盐/有机相系统。

     

     

    缓冲能力与pH选择

     

    流动相如用到缓冲盐溶液,其应当有一定的缓冲能力,如果减少进样量,峰形改善,则说明很可能缓冲盐溶液缓冲能力不足。缓冲盐溶液的缓冲能力与缓冲盐浓度、缓冲盐溶液的pH值相关。缓冲盐浓度越大,缓冲能力越强;缓冲盐溶液的pH值越接近其pka,缓冲能力越强。一般缓冲盐溶液的pH值应在其pka±1的范围内,为了确保主成分的保留时间不因pH值的微小变化产生大的偏离,缓冲盐溶液的pH值应在样品pka±2的范围外。

     

     

     

    截止波长

     

    每种缓冲盐都有其对应的截止波长,方法的检测波长不得小于缓冲盐溶液的截止波长。检测波长越接近流动相截止波长,基线噪音越大,响应值误差越大,组分响应值和灵敏度变小。

     

     

    常用缓冲盐pka与截止波长列表

     

    缓冲盐

    pka

    缓冲范围

    截止波长

    磷酸盐

    2.1

    <3.1

    <200nm(0.1%)

    7.2

    6.2-8.2

    12.3

    11.3-13.3

    甲酸盐

    3.8

    2.8-3.8

    210nm(10mM)

    乙酸盐

    4.8

    3.8-5.8

    210nm(10mM)

    碳酸盐

    6.4

    5.4-7.4

    <200(10mM)

    三乙胺

    11.0

    10.0-12.0

    <200(10mM)

    三氟乙酸

    ≥2

    1.5-2.5

    210nm(0.1%)

     

     

     

    缓冲盐应用一般思路

     

    1、 缓冲盐浓度一般为10-50mmol/l。根据样品性质及进样量选择缓冲盐浓度,使其满足应有的缓冲能力。

     

    2、 梯度洗脱中有机相比例允许的最高值,应根据缓冲盐与有机相混溶实验确定。取不同缓冲盐-有机相比例,确定有机相比例允许最高值,如缓冲盐:有机相为10:90、20:80、30:70等不同比例。不得在仪器上随意设置高比例有机相,以防缓冲盐析出损坏仪器。

     

    3、 根据截止波长、pH值和缓冲能力等多个约束条件选择缓冲盐,如检测波长在末端吸收,则一般应选用磷酸盐。

     

    4、 常用缓冲盐溶液有:0.1%磷酸/三氟乙酸/乙酸/甲酸溶液,0.02-0.05mol/l 磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH至3.0)等

     

     5、碱性化合物优选钾盐,抑制拖尾效果更好。

     

     

       作者:占小兵 上海博志研新药物技术有限公司